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細胞培養及種類與基本成分與選購指南 蒂科生物

2017-01-18 瀏覽次數:2631

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細胞培養基的種類很多,按其來源分為合成培養基和天然培養基(目前使用的培養基絕大部分是合成培養基),按其物質狀態分為干粉培養基和液體培養基兩類。干粉培養基需要實驗者自己配制并滅菌,液體培養基由專業商家提供,用戶可直接使用,非常方便。

1,合成培養基的主要成分有:氨基酸,碳水化合物,無機鹽,維生素及其他輔助位置:

 

氨基酸

 

氨基酸是組成蛋白質的基本單位。不同種類的細胞對氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,必須依靠培養液提供,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氧酰胺是細胞合成核酸和蛋白質必須的氨基酸,在缺少谷氧酰胺時,細胞生長不良而死亡。因此,各種培養液中都有較大量的的谷氧酰胺。但是,由于谷氧酰胺在溶液中很不穩定,應置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培養液內。已含谷氧酰胺得培養液在4℃冰箱中儲存兩周以上時,還應重新加入原來量的谷氧酰胺。

 

碳水化合物

 

碳水化合物是細胞生長主要能量來源,其中有的是合成蛋白質和核酸的成分。主要有葡萄糖,核糖,脫氧核糖,丙酮酸鈉和醋酸等.

 

無機鹽

 

培養液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡。此外,通過提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細胞調節細胞膜功能。培養液的滲透壓是一個非常重要的因素,細胞通??赡褪?60m0sm/kg~320m0sm/kg。標準培養液的滲透壓在此范圍內波動。特別注意:向培養液中加入其他物質有可能會明顯改變培養液的滲透壓,特別是溶于強酸或強堿中的物質。向培養液中添加HEPES時需按以下方法調節鈉離子濃度。

 

緩沖系統

 

大多數細胞所需pH在7.2-7.4.但是,細胞培養zui適pH值隨培養的細胞種類不同而不同。成成纖維細胞喜歡較高pH(7.4-7.7)而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH(7.0-7.4)。

 

由于多數培養液靠碳酸氫鈉(NaHC03)與C02體系進行緩沖,因此氣相中的C02濃度應與培養液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養箱空氣中C02濃度設定在5%,培養液中NaHC03的加入量為1.97g/L;如果C02濃度維持在10%,培養液中NaHC03的加入量為3.95g/L。

 

細胞培養瓶蓋不應該擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH7.2-7.4范圍內具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因2額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養條件下,細胞培養瓶的蓋子應擰緊,以防止培養液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數培養液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養液呈橙黃色,堿性培養液呈深紅色。

 

維生素

 

在細胞培養中,盡管血清是維生素重要來源,但是許多培養基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長。

 

其他成分

 

有一些較為復雜的培養液中還包括其他一些成分。如在雜交瘤技術中常用的DMEM培養液,使用時還需要補加丙酮酸鈉和2-疏基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-Me)對細胞生長有很重要的作用。有人認為它相當于胎牛血清,有直接刺激細胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氧基,其中一個重要的作用是使血清中的含硫的化合物還原成谷胱甘肽,能誘導細胞增殖,為非特異性的激活作用。同時避免過氧化物對培養細胞的損害。另一個重要作用是促進分裂原的反應和DNA合成,增加植物凝集素(PHA)對淋巴細胞的轉化作用,已廣泛應用于雜交瘤技術,另外,也開始用于一些難以培養的細胞。2-Me是一種小分子還原劑,極易氧化。分子量為78.13,純的2-Me是無色有刺激味的液體,比重為10110-1.120(Do20),常用終濃度為5×10-5M。常配制成0.1M的儲存液,用時每升培養液加0.5ml。

 

 

液體培養基保存:

 

 

液體培養基應于4℃冰箱避光保存,實驗前放入37℃預熱。未加血清液體培養基有效期為12個月。液體培養基中的L-谷氧酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細胞生長不良,可以再添加適量L-谷氧酰胺。

 

干粉培養基保存:

 

4℃冰箱避光保存,有效期36個月

 

 

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