幾種常見(jiàn)的提取外泌體方法

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外泌體是大小30-200nm的膜性小囊泡，在血液、尿液、羊水、惡性腫瘤、腹水等體液及細(xì)胞培養(yǎng)上清中均存在。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)和功能性的RNA等生物活性分子，和體內(nèi)多種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。因外泌體攜帶重要的生物信息，使它具有很重要的潛在應(yīng)用價(jià)值，一方面外泌體可以作為疾病的診斷標(biāo)志物，另一方面外泌體可以作為一種治療手段，未來(lái)有望通過(guò)外泌體載藥用于疾病的治療。正因如此，外泌體的研究持續(xù)高熱度。

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外泌體研究的首要任務(wù)是對(duì)外泌體進(jìn)行提取純化，提取外泌體的方法很多，那哪種方法提取外泌體*呢？

一、超速離心方法

原理：基于不同顆粒密度、沉降系數(shù)不同，利用低速離心和高速離心交替進(jìn)行的方法分離外泌體顆粒。

優(yōu)點(diǎn)：文獻(xiàn)引用較多，如實(shí)驗(yàn)室設(shè)備條件滿足，可省成本

缺點(diǎn)：需要大型離心機(jī)，高離心力會(huì)損傷外泌體；操作耗時(shí)；步驟繁瑣；產(chǎn)量不穩(wěn)定（受轉(zhuǎn)子、轉(zhuǎn)速、起始樣本量等多因素影響）；起始樣本量需求高

二、密度梯度離心

原理：在超速離心力的作用下，使氯化銫或蔗糖等介質(zhì)形成密度階層，通過(guò)密度梯度離心，讓外泌體沉降在某一個(gè)密度范圍。

優(yōu)點(diǎn)：純度相對(duì)較高

缺點(diǎn)：操作非常復(fù)雜且耗時(shí)，需要大型離心機(jī)

三、免疫磁珠法

表面包被標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后，特異性識(shí)別外泌體特異性標(biāo)志物（CD9、CD81、CD63等）。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、純度較高

缺點(diǎn)：成本高；產(chǎn)量少，只能收集一類exosome，損失多；步驟繁瑣；種屬特異性限制；需要磁力架和冷凍離心機(jī)等儀器

四、PEG沉淀法

聚乙二醇（PEG）可與水分子形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，捕獲一定粒徑大小的外泌體顆粒。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單；不需要大型離心機(jī)等儀器

缺點(diǎn)：市面上品牌眾多，大多可靠性差；發(fā)表文章易受質(zhì)疑等。

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介紹了這么多種方法，那究竟哪種方法是*的提取外泌體的方法呢？以上方法都有優(yōu)劣，并沒(méi)有哪一種方法就是*方法，因綜合衡量實(shí)驗(yàn)要求、實(shí)驗(yàn)室經(jīng)費(fèi)、儀器設(shè)備等諸多因素。

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