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技術(shù)文章 / article
143B細胞人骨肉瘤細胞
2020-06-08 瀏覽次數(shù)：1418
143B細胞人骨肉瘤細胞
細胞名稱 | 143B 人骨肉瘤細胞 |
貨號 | H002 |
種屬 | 人 |
細胞來源 | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進 |
生長特性 | 貼壁 上皮樣 |
培養(yǎng)條件 | 培養(yǎng)基：90%DMEM(H)+10%FBS 溫度：37℃ 氣相：95%空氣，5%二氧化碳 |
傳代 | 1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液； 2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，傳代比例為1:3到1:6； 3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（第D一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為D佳消化時間，記錄D佳消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。 |
保存 | 凍存條件：80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO (備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預(yù)熱后使用。) 保存條件：液氮存儲 |
供應(yīng)限制 | 經(jīng)供研究之用 |
常見問題及解決方案 | 1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。 2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間長不宜超過 72 小時） 3.細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。 |
143B細胞人骨肉瘤細胞
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