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技術文章 / article
細胞解凍過程中，存活率低怎么辦？
2022-01-10 瀏覽次數：1525
出現低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：
1.解凍過程中細胞裂解
推薦的解決方案：可預期到一定量的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠高，考慮到這一損失。起始濃度為106至107細胞/毫升。
2.解凍過程中的問題
推薦的解決方案：在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養物，保存時間為1-5天，但這不是保存的優先方法。在37℃充分解凍后應立即開始培養。
3.對冷凍液過敏
推薦的解決方案：
A.*或部分更換培養基，減少培養基中冷凍液的量。在24小時后更換培養液體可全部去除冷凍液。
B.留出更多時間供培養物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數或在生長階段中的位置。冷凍的最佳條件在對數期。
4.被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養物的年齡
推薦的解決方案：解凍最近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態的時間越長，存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數期。
出現大量細胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下：
1.冷凍時細胞密度過低
推薦的解決方案：縮短解凍過程中的時間。將細胞取出后，立即將凍存管浸入在37℃的水浴中，并震蕩至全部融化，然后迅速地轉移到預熱的培養基中。
2.不適當的冷凍過程
推薦的解決方案：解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當的技術，并確保使用了適量和適合的冷凍液。
出現生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下：
1.培養瓶的大小
推薦的解決方案：一些細胞在培養基中傾向于維持一定的密度。將培養物轉移到較小的培養瓶中，使細胞密度上升；如，根據培養基的體積，從75cm2的燒瓶轉移到2或3個25cm2的燒瓶中。
2.細胞密度過低
推薦的解決方案：提高未來冷凍物種細胞的凍存密度，或使用較小的培養容器，或解凍多個試管來進行培養。
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