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技術(shù)文章 / article
原代細胞的提取方法詳細步驟
2022-03-24 瀏覽次數(shù)：1786
原代細胞是通過一定的方法如酶法或機械法或生長法使細胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環(huán)境條件下分離的細胞在體外或其他人體和動物體內(nèi)生長。
原代細胞的提取方法詳細步驟：
1)整個操作要在潔凈通風的超凈臺下進行，所有的器材要高壓消毒。
2)根據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的戊ba比妥鈉麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上。
3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器插入心尖，同時在右心耳處剪開一個小口，緩慢推動注射器，隨著心臟的跳動，將體內(nèi)的血液沖洗出來。
4)取出小鼠的肺部組織，將肺組織切成小米粒樣的大小，置于預冷的HBSS中反復沖洗幾次。
5)將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中（培養(yǎng)瓶前一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面，4度過夜，小鼠處理前，將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中，使其溫度恢復至37度），置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下，消化4個小時。
6)消化4小時后，加入培養(yǎng)基（添加培養(yǎng)基，可以是正常培養(yǎng)時的2倍量），繼續(xù)培養(yǎng)24小時（繼續(xù)培養(yǎng)的時間可根據(jù)細胞貼壁情況適當調(diào)整）。
7)24小時后，取出肺組織，鏡下觀察細胞狀態(tài)，換液。
8)原代細胞的提取和培養(yǎng)是很慢的過程，一般需等到24小時后，才能在鏡下看到些許細胞群，一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的排列情況。
9)原代細胞2-3天換液一次，因為內(nèi)皮細胞生長形成單層時，會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以，內(nèi)皮細胞生長接近單層時就可以傳代了，不要等到長得非常滿。
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