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2017-01-17 瀏覽次數(shù)：1678

細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)面面觀

具體步驟：

1.將水浴鍋預(yù)熱至40℃

2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。

4.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。

5.從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對管外的編號。

6.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化。

7.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，

8.平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min

9.吸棄上清液。

10.向凍存管內(nèi)加入1ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。

zui后將細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)12-24小時(shí)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。

注意事項(xiàng)：

1>復(fù)蘇時(shí)選用的培養(yǎng)基要符合凍存管上標(biāo)明的培養(yǎng)基。2>操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。3>自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時(shí)蓋子易松掉。

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